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详细信息

PicoGreen双链DNA荧光定量测定狗万 提款保证_狗万什么app_狗万app产品说明书

?PicoGreenDNA荧光定量测定狗万 提款保证_狗万什么app_狗万app品说明书

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主要用途

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?PicoGreenDNA荧光定量测定试剂是一种旨在通过使用PicoGreen荧光染料与样品中双链DNA的高度特异性结合而产生荧光信号来精确定量样品中DNA含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的其适用于各种原核生物和真核生物的细胞或组织DNA以及环境中DNA含量分析。产品严格无菌,即到即用,性能稳定,高度敏感。

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技术背景

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作为DNA染色剂之一的PicoGreen荧光染料特异性地样品中双链DNA结合,产生荧光信号。PicoGreen技术可以检测到低达0.5纳克双链DNA的变化。DNA的微量增加引起荧光信号强度(Intensity)或相对荧光单位(RFU)的显着增加。其自发荧光(Autofluorescence)忽略不计,重复性标准差异(Standard Deviation)低,不受样品化学成分的干扰。

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产品内容

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染色液Reagent A ??????62.5微升

稀释液(Reagent B ??????15?毫升

标准液(Reagent C ???????????1

产品说明书 ????????????????1份

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保存方式

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保存染色液Reagent A)和标准液(Reagent C在-20℃冰箱里,其余的保存在4冰箱里,染色液(Reagent A)避免光照有效保证6

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用户自备

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1.5毫升离心管:用于工作液配制的容器

比色皿或96孔板:用于荧光分析的容器

荧光分光光度仪或荧光酶标仪:用于荧光定量分析

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实验步骤

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一、?测定准备

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1.?准备好待测样品,置于冰槽里

2.?设定好荧光分光光度仪(温度为37℃):激发波长480nm,散发波长530nm,并置零?

3.?实验开始前,将-20℃冰箱里的狗万 提款保证_狗万什么app_狗万app中的染色液(Reagent A置于冰槽里融化。然后移出5毫升稀释液(Reagent B到新的15毫升离心管,加入25微升染色液(Reagent A,混匀后,用锡纸包裹,标记为染色工作液,放在暗室里。然后进行下列操作。

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二、?构建标准曲线

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1.?准备好51.5毫升离心管,标记为15号管

2.?分别加入500微升稀释液(Reagent B到每个离心管

3.?移取500微升标准液(Reagent C1号管,混匀

4.?小心移取500微升1号管稀释的标准液(Reagent C2号管,混匀

5.?小心移取500微升2号管稀释的标准液(Reagent C3号管,混匀

6.?小心移取500微升3号管稀释的标准液(Reagent C4号管,混匀

7.?15号管放进冰槽里备用;标准管含量见下表

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管号

缓冲液(Reagent B

标准液(Reagent C

标准DNA总量

1

500微升

500微升

1微克

2

500微升

500微升1号管

0.5

3

500微升

500微升2号管

0.25

4

500微升

500微升3号管

0.125

5

500微升

空对照

0

?

8.?移取500微升含有染色液(Reagent A稀释液(Reagent B染色工作液新的比色皿

9.?加入500微升上述配制的标准液

10.?室温下,孵育5分钟,避免光照

11.?即刻放进荧光分光光度仪测读:获得相对荧光单位(Relative Fluorescence UnitRFU

12.?重复实验步骤811四次

13.?绘制标准曲线:纵座标(Y轴)为相对荧光单位(RLU);横坐标(X轴)为DNA含量(微克)

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三、?样品检测

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1.?移取500微升含有染色液(Reagent A稀释液(Reagent B染色工作液新的比色皿

2.?加入500微升待测样品

3.?室温下,孵育5分钟,避免光照

4.?即刻放进荧光分光光度仪测读:获得相对荧光单位(Relative Fluorescence UnitRFU

5.?根据标准曲线获得样品对应DNA含量微克

6.?样品实际DNA浓度:

[根据标准曲线获得样品对应DNA含量(微克)X样品稀释倍数]0.5(样品容量;毫升)=微克/毫升

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注意事项

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1.?本产品为20次(比色皿100次(96孔板)操作,包括标准曲线测定

2.?操作时,须戴手套

3.?使用新鲜配制的染色工作液,务必不要超过2小时,且注意避光

4.?建议使用塑料管配制染色工作液,而不是玻璃制品

5.?孵育时,避免光照

6.?系统检测,标准曲线测定1次即可;如果仪更换,则需要重新测定1

7.?如果荧光读数过高,可以相应稀释样品量

8.?可以使用荧光酶标仪检测,试剂用量和体系均除以5,包括标准DNA含量,其计算公式

?

[根据标准曲线获得样品对应DNA浓度(微克X样品稀释倍数0.1(样品容量;毫升)微克/毫升

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9.?盐类、尿素、乙醇、lv仿、去垢剂、蛋白、琼脂糖、单链DNARNA不会干扰检测

10.?本公司提供系列DNA检测试剂产品

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质量标准

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1.?本产品经鉴定性能稳定

本产品经鉴定高度敏感

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